Imunochemická detekce metalothioneinu za použití myších a slepičích protilátek.

Metalothionein je lokalizován v histologických řezech za použití komerčně připravované myší protilátky E9. Pro naše účely byla připravena protilátka z vajíček slepic imunizovaných metalothioneinem. Polyklonální protilátka byla purifikována afinitní chromatografií. Nespornou výhodou imunizace slepice je získání dostatečného množství protilátky (sběr několika vajíček) a zvíře nemusí být usmrceno. Nejdříve byly v našich testech ověřovány způsoby vazby metalothioneinu k mikrotitrační destičce. Na mikrotitrační destičky byl adsorbován metalothionein. Po důkladném omytí nenavázaného proteinu byla aplikována různá ředění jak slepičí primární (1:50, 1:100, 1:200, 1:300, 1:500, 1:700 a 1:1000), tak králičí sekundární protilátky (1:1000, 1:2000, 1:5000 a 1:10000). Byl sledován nárůst absorbance při 450 nm. Jako nejvhodnější kombinace bylo vybráno ředění primární protilátky 1:200 a u sekundární