Klin Onkol 2002; 15(4): 155-156.
NOVÉ SIGNÁLNÍ MOLEKULY A NOVÉ PŘÍSTUPY K TERAPII NÁDOROVÝCH ONEMOCNĚNÍ
Ve dnech 8. 11. června 2002 se konalo ve španělské Granadě již XVII. sympozium mezinárodní společnosti EACR („European Association for Cancer Research“). Samotný vědecký program byl rozdělen do mnoha sekcí, z nichž nejvýznamnější se věnovaly nádorové epidemiologii, epigenetice, buněčné proliferaci a buněčnému cyklu, apoptóze, angiogenezi, mechanizmům invaze a metastázování, novým přístupům v terapii, signální transdukci a signálním dráhám, expresi genů a regulaci transkripce, opravným mechanizmům DNA, imunoterapii a monoklonálním protilátkám, genomice a proteomice, mechanizmům nádorové rezistence, farmakogenomice, prediktivním a prognostickým markerům, molekulární onkologii, klinické onkologii a nádorové imunologii.
Sobotní dopolední předprogram byl zahájen sympoziem španělských onkologických center (10:00–13:00) s názvem „Přítomnost a budoucnost výzkumu rakoviny ve Španělsku". Celkem zde hovořillo 11 čelních představitelů těchto domácích ústavů. Dále následovalo ASEICA („Asociación Espoňola de Investigación sobre el Cáncer“) edukační sympozium (14:00–15:30) s názvem „Drug resistance and molecular target technology“, kde zazněly na toto téma celkem 3 příspěvky.
V těsné návaznosti následovalo satelitní sympozium firmy Merck (16:00–18:00), které mělo 2 sekce. V první části zaměřené na bioterapii nádorových onemocnění referovali Dr. Yarden z Izraele a Dr. Baselga ze Španělska o pokrocích v signálních mechanizmech rodiny EGF receptorů a o protinádorové terapii zacílené právě proti EGFR. Druhá část byla zaměřena na nádorovou angiogenezi (Dr. Kerbel z Kanady) a na antagonisty integrinu (Dr. Mitjans ze Španělska).
Teprve v podvečer byl slavnostně zahájen vlastní kongres (18:30–19:00). Následovala „Mühlbock Memorial Lecture“ (19:00–20:00) profesora Bodmera z Velké Británie na téma „Somatická evoluce nádoru kolorekta“. Po zformulování Knudsonovy hypotézy, předložené před více než 30 lety, která vztahovala nádorové supresorové geny a dominantně dědičnou náchylnost k rakovině, bylo možno ukázat, že gen označovaný jako APC, mutovaný v rodinách FAP („familial adenomatous polyposis“), je klíčový první krok u 80 % všech sporadických kolorektálních karcinomů. To přináší nový pohled na porozumění základních mechanizmů tvořících základ vývoje nádorových onemocnění, ze kterých budou plynout nové přístupy k prevenci, časné detekci a vývoji lépe cílených léčebných přístupů, ne pouze pro kolorektum, ale rovněž pro mnoho dalších onkologických onemocnění. Po skončení této přednášky následoval krátký koncert a nakonec slavnostní recepce.
Od neděle až do úterý byla struktura sympozia následující: odborný program byl každé ráno zahájen plenární přednáškou významných světových odborníků (8:30–10:00) a v těsné návaznosti pokračovala přednáška udělená za významné objevy na poli výzkumu rakoviny a to včetně mladých vědců (10:00–10:30). Po krátké přestávce následovalo paralelně „Basic Science Symposium“ a „Translational Research Symposium“ (11:00–13:00), která probíhala rovněž i odpoledne (17:45–19:45). Ve 13:15–14:00 byl pravidelný čas na hlavní přednášku dne („Keynote lecture“). Kromě toho v odpoledních hodinách probíhalo paralelně několik dalších akcí (např. „Proffered papers, Microarray technology workshop, ASEICE symposium, Satellite symposium“). Nebyl problém si vybrat zajímavou přednášku, ale často spíše býval problém si „nevybrat“.
V sekci věnované výzkumu signálních drah Dr. Aznar Benitah z Madridu, který byl nakonec po zásluze oceněn „EACR-MSD Meeting Award“, prezentoval nové výsledky v oblasti regulace STAT 3 transkripčního faktoru pomocí Rho GTP-as. Rho GTP-asy patří mezi rodinu Ras, o které je známo že je zahrnuta v kritických buněčných funkcích jako je buněčný růst, vývoj, apoptóza, buněčná cytoarchitektura a buněčná adheze. Tyto enzymy byly rovněž spojeny jak s tumorigenními tak metastatickými procesy. Autoři zkoumali modulaci aktivity transkripčního faktoru STAT 3 v onkogenních buňkách transformovaných Rho a jeho význam při transformaci. Našli novou signální dráhu, kterou Rho A indukuje tyrozinovou a serinovou fosforylaci proteinu STAT 3, přičemž obě tyto aktivace jsou nutné pro jeho úplnou transkripční aktivitu. Tyrozinová fosforylace STAT 3 pomocí Rho A je nutná pro jeho DNA vazebnou aktivitu a je využívána jak JAK-2 tak i členem rodiny Src, Lck.
Serinová fosforylace STAT 3 indukovaná Rho A je využita JNK-1, avšak ne Erk-1/2 ani p38 MAPK, a je nepostradatelná pro jeho maximální transkripční aktivitu. Navíc společná exprese „wild-type“ netransformovaného STAT 3 společně s Rho A významně zvyšuje onkogenní potenciál buněk. Podobně dominantně negativní mutanty STAT 3 narušily transformaci indukovanou Rho A. Vycházejíce ze zapojení obou těchto proteinů do vzniku a vývoje lidských nádorů, tak by dráha mezi nimi mohla představovat pravděpodobný směr pro vývoj nových léčiv s antineoplastickou aktivitou.
V sekci „Cell proliferation and cell loss“ se Dr. Real ze španělského Santanderu věnoval na STAT 3 závislé zvýšené expresi proteinu Bcl-2, která může učinit metastatické nádorové prsní buňky rezistentní k taxolem indukované apoptóze. Zatím je však málo známo o molekulárních dráhách, které aktivují příslušné geny na specifických místech metastáz. Autoři analyzovali lidskou nádorovou buněčnou linii prsu MDA-MB 435 a 2 metastatické linie odvozené z nádoru plic (435 L) a mozku (435 B).
Hladiny Bcl-2, jak na úrovni proteinu tak i na úrovni mRNA, byly vyšší v metastatických liniích než v rodičovské linii, přičemž nejvyšší hladina byla detekována v linii 435 B. Naopak exprese Bcl-XL byla pouze mírně zvýšená a hladiny Mcl-1, Bad a Bax byly buď snížené anebo nezměněné. Exprese Bcl-2 korelovala s aktivací STAT 3, ale ne s hladinou nebo aktivací známých Bcl-2 transkripčních faktorů jako jsou CREB a WT1.
V linii odvozené od nádoru mozku (435 B) byly indukovány jak hladina Bcl-2 tak i aktivace STAT 3 epidermálním růstovým faktorem (EGF) a byly přerušeny po působení inhibitorů tyrozinkináz specifických pro EGF receptor nebo JAK-2. Navíc transfekce buněk 435 B dominantně negativním STAT 3
význačně snížila hladinu Bcl-2. Kromě toho inhibice STAT 3 aktivace působením EGF receptoru a inhibitorů JAK-2 kináz nebo transfekce dominantně negativním STAT 3 senzibilizuje buňky 435 B k taxolem indukované apoptóze. Zvýšená aktivace STAT 3/Bcl-2 dráhy v metastatických prsních nádorových liniích může zajistit výhodu v přežívání těchto buněk a přispět k jejich chemorezistenci nebo metastatickému fenotypu.
V sekci věnované novým terapeutickým přístupům v léčbě nádorových onemocnění vynikla přednáška Dr. Armanda z Francie, který referoval o nových protinádorových léčivech pocházejících z moře. Jako výsledek intenzivního výzkumu a preklinické vývojové strategie byl realizován klinický program zahrnující 3 produkty získané z moře. Od května 1996 do března 2001 vstoupilo do klinických zkoušek ve fázi I a II celkem 1148 pacientů s nádorovým onemocněním, kteří byli léčeni Ecteinascidinem-743 (ET-743), Aplidinem (APL) nebo Kahalalidem F (KF). ET-743, alkaloid izolovaný z „tunicate E. turbinata“, je nové agens interagující s DNA, které je rovněž modelem nové třídy látek, jež interagují s nukleárními proteiny.
Fáze I prokázala, že ET-743 vykazuje dlouhodobou odpověď u pacientů s pokročilými sarkomy prsu, nádory vaječníku a melanomy. Předběžné výsledky na pokročilých prsních nádorech prokázaly aktivitu u pacientů rezistentních na antracykliny a taxany. APL je nový peptid izolovaný ze středozemního „tunicate A. albicans“. Jeho protinádorová aktivita koreluje s inhibicí syntézy proteinů a s interakcí s VEGF dráhou.
APL je první přírodní protinádorová látka s antiangiogenními účinky. Klinické zkoušky ve fázi I prokázaly jeho aktivitu u pacientů s pokročilým nádorem kolorekta a ledvin. KF je nový cyklický peptid izolovaný z „molluse E. rubefescens“. Zdá se, že lyzozómy jsou buněčným cílem tohoto léčiva. Nejnovější výsledky prokázaly interakci s dráhou HER-2/neu.
V sekci „Imunoterapie a monoklonální protilátky“ hovořil Dr.Groner z Frankfurtu na téma „Bifunkční rekombinantní proteiny v terapii onkologických onemocnění“. Informace o deregulované expresi receptorů růstových faktorů na povrchu nádorových buněk vedly k zavedení nových tříd léčiv. Monoklonální protilátky specifické pro extracelulární doménu (např. EGF nebo erbB-2 receptorů) interferují se signální transdukcí a růstem nádorových buněk in vitro a in vivo. Inhibiční potenciál takovýchto protilátek může být zvýšen jejich spojením s bakteriálními toxiny. Biotechnologické metody umožnily získat bifunkční fúzní proteiny, ve kterých je specificita rozpoznávací domény protilátky kombinována se schopností bakteriálních toxinů inhibovat buněčnou syntézu bílkovin. Takové proteiny mohou být exprimovány v baktériích ve velkých množstvích a rovněž bylo prokázáno, že zabíjejí lidské nádorové buňky prsu a vaječníku. Pro specifickou interferenci s regulací protein-proteinových interakcí byly zavedeny peptidové aptamery, což jsou bílkoviny, do kterých byla vložena peptidová doména s afinitou pro určitý protein. Purifikované bílkoviny mohou být dopraveny s vysokou účinností do buněk a inhibovat signální dráhy. V poslední době byly nalezeny peptidové aptamery specifické pro STAT 3 a EGF receptor, které jsou schopny zastavit růst nádorových buněk.
Velice zajímavá byla „Mike Price lecture“ profesora Mendelsohna z texaského Houstonu, který podal přehled o budoucnosti vývoje protinádorových léčiv. EGF receptory jsou exprimovány ve zvýšených hladinách asi u 1/3 epitheliálních nádorů a autokrinní aktivace EGFR se zdá být kritická pro růst mnoha nádorů. Autofii hypotetizují, že blokáda vazebných míst pro EGF a TGF-alfa na EGF receptoru pomocí antireceptorové monoklonální protilátky (mAb) by mohla být efektivní protinádorová terapie. Myší mAb 225 blokovala funkci EGFR a inhibovala buněčný růst v kultuře i v myších xenograftech. C 225 je lidská-myší chimérická verze mAb 225.
Z výsledků výzkumu naší laboratoře bylo na sympoziu prezentováno sdělení: Boudný V., Chumchalová J., Fait V., Kovařík J.: DEFECTS IN STAT 1-MEDIATED INTERFERON SIGNALLING IN CANCER CELLS. Rev. Oncol., 4, suppl. 1, p. 61-62, 2002.
Příští sympozium pod označením EACR 18 (18th Meeting of the European Association for Cancer Research) se bude konat ve dnech 3. – 6. července 2004 v Innsbrucku, v nádherném okolí Tyrolských Alp.
